Efeito de vitaminas adicionadas ao diluente ACP-104 sobre a qualidade do sêmen criopreservado de carpa comum (Cyprinus carpio) / Effect of vitamins added to the ACP-104 extender on the quality of cryopreserved semen of common carp (Cyprinus carpio)

O objetivo da presente pesquisa foi alcançado com a divisão da pesquisa em dois experimentos: (1) aperfeiçoar o protocolo de congelação utilizando água de coco em pó (ACP-104) como diluente para a criopreservação seminal de carpa comum; (2) avaliar o efeito da suplementação das vitaminas C (ácido ascórbico) ou E (α-tocoferol) sobre os melhores diluidores testados no experimento 1 na qualidade do sêmen pós-descongelado da espécie. Para o experimento 1, foram formados oito pools de sêmen, provenientes de 14 machos selecionados. As amostras seminais coletadas foram avaliadas quanto à motilidade total, à velocidade, ao percentual de espermatozoides normais e à vitalidade espermática antes e depois da criopreservação seminal. Esta foi realizada em meio ACP-104 acrescido de dimetilsulfóxido (DMSO), ou etilenoglicol (EG), ou glicerol, ou metanol, todos à concentração de 10%, diluídos em 1:3 (sêmen:diluidor). As amostras foram, então, congeladas em vapor de nitrogênio líquido em dry shipper e estocadas em nitrogênio líquido (-196°C). Para o experimento 2, foram formados oito pools provenientes da coleta de sêmen de 15 machos. As amostras seminais foram avaliadas seguindo as mesmas análises do experimento 1, acrescentando-se a duração da motilidade total. A criopreservação seminal utilizou-se do meio ACP-104 acrescido de DMSO ou EG, suplementado ou não com vitamina C ou E. Os melhores resultados encontrados no experimento 1 foram obtidos com o DMSO e o EG. Estes não diferiram significativamente entre si para a motilidade total (24% e 28%; P>0,05) e a normalidade espermática (32% e 26%; P>0,05), respectivamente. Para o experimento 2, o EG suplementado com vitamina E produziu significativamente resultados superiores de motilidade total, normalidade espermática e duração da motilidade em relação ao DMSO, concluindo-se que o EG deve ser, portanto, o crioprotetor de escolha a ser utilizado com o ACP-104 suplementado ou não com vitamina E.(AU)

The objective was achieved by dividing the research into two experiments: (1) improving the freezing protocol using powdered coconut water (ACP-104) as a diluent for the cryopreservation seminal of common carp; (2) evaluating the effect of supplementation of vitamins C (ascorbic acid) or vitamin E (α-tocoferol) with the best extenders tested in experiment 1 on the quality of post-thawed. For experiment 1, semen pools from 14 selected males were formed. Seminal samples were evaluated for total motility, velocity, percentage of normal sperm and sperm vitality before and after the seminal cryopreservation. This was done in ACP-104 extender plus dimethyl sulfoxide (DMSO), or ethylene glycol (EG), or glycerol or methanol all at concentration 10% diluted in 1:3 (semen:extender). The samples were frozen in vapors of nitrogen into dry shippers and stored in liquid nitrogen (-196 °C). For experiment 2, eight pools were formed from the 15 males. The semen samples were evaluated following the same analysis of experiment 1 adding duration of total motility. The sperm cryopreservation was performed in extenders ACP-104 plus DMSO or EG supplemented or not with vitamin C or E. The best results found in Experiment 1 were obtained with DMSO and EG. They do not differ significantly for total motility (24% and 28%; P>0.05) and normal sperm (32% and 26%; P>0.05) respectively. For experiment 2, EG supplemented with vitamin E, produced significantly better results overall motility, sperm normality and duration of motility relative to DMSO. In conclusion, EG should be the cryoprotectant of choice for use with the ACP-104 supplemented or not with vitamin E.(AU)

Cinética e morfologia de espermatozoides de carpa comum criopreservados em água de coco em pó acp-104 / Kinetics and morphology of common carp sperm cryopreserved in powdered coconut water acp-104

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes taxas de diluição seminal sobre a motilidade, velocidade e presença de anormalidades espermáticas no sêmen descongelado de carpa comum (Cyprinus carpio). Utilizaram-se 20 machos sexualmente maduros, pertencentes ao Departamento Nacional de Obras Contra as Secas (DNOCS). A partir do sêmen coletado, foi formado um total de nove pools. O sêmen de cada pool foi avaliado quanto à motilidade, velocidade e morfologia espermática antes e depois da criopreservação. A criopreservação seminal foi realizada em meio ACP-104 + DMSO 10% diluído em 1:1 ou 1:3 (sêmen:diluidor). As amostras foram envasadas em palhetas de 0,25mL, congeladas em vapor de nitrogênio líquido (caixa de poliestireno) e estocadas em nitrogênio líquido (-196 °C). Não houve diferença significativa (P>0,05) entre as taxas de diluições sobre os parâmetros cinéticos e morfológicos de sêmen descongelado de carpa comum. Entretanto, esses parâmetros apresentaram diferença significativa (P<0,05) em relação ao sêmen fresco (controle). Baixos valores de velocidade foram registrados no sêmen descongelado (VCL 42,6-46,5μm/s; VSL 33,2-37,1μm/s; VAP 38,9-43,2μm/s); contudo, observaram-se motilidades acima de 59% (59,8-67,8%) e baixos índices de anormalidades espermáticas (19,3-19,5%), sugerindo que o ACP pode ser usado como um meio favorável à criopreservação do sêmen de carpa comum em qualquer uma das taxas de diluição testadas.

The aim of this study was to determine the effects of various dilution ratios on thaw sperm motility, velocity and presence of spermatic abnormalities in the common carp. 20 males with three years of age, raised at the Departamento Nacional de Obras Contra as Secas (DNOCS) were used. From the collected semen a total of nine pools were formed. The semen from each pool was evaluated for motility, velocity and spermatic morphology before and after cryopreservation. The sperm cryopreservation was performed in medium ACP-104 + DMSO 10% diluted in 1:1 or 1:3 (sperm:extender). The samples were loaded into 0.25mL straws, frozen in liquid nitrogen vapor (Styrofoam) and stored in liquid nitrogen (-196 °C). There was no significant difference (P>0.05) between the ratios of dilution on the kinetic and morphological parameters of thawed semen from common carp. However, these parameters were significantly different (P<0.05) compared to fresh semen (control). Low velocity values were recorded in thawed semen (VCL 42.6-46.5μm/s; VSL 33.2-37.1μm/s; VAP 38.9-43.2μm/s), however, observed motility above 59% (59.8-67.8%), and low levels of spermatic abnormalities (19.3-19.5%) suggested that the ACP-104 can be used as a suitable medium for cryopreservation of common carp semen in any of the tested dilution ratios.